近日，武漢，檢測人員在對采集來的樣本進行標本信息核對。新華社記者 程敏攝
在廣東省第二人民醫院P3實驗室標本處理間內，研究人員正進行開蓋加樣和核酸提取。受訪者供圖
核酸(suan)檢(jian)測是確(que)診新冠肺炎的(de)(de)“金標(biao)準”，而檢(jian)測流程中的(de)(de)每一個環節都(dou)是精細活，容不得(de)半點馬虎。
“這里(li)是與病毒‘零距離’接(jie)觸的(de)地方，整個實驗室(shi)完全(quan)密封，室(shi)內處于(yu)負壓狀態，我們喜歡用‘三流(liu)’來(lai)形容它，即人流(liu)、物(wu)流(liu)、氣流(liu)的(de)單向(xiang)流(liu)動，確保在(zai)里(li)面的(de)污染(ran)(ran)物(wu)不會泄漏到外面而(er)造成污染(ran)(ran)。”廣東(dong)省第二人民(min)醫(yi)(yi)院P3實驗室(shi)主(zhu)任林劍國(guo)說。而(er)他說的(de)“這里(li)”指的(de)就是P3實驗室(shi)（生物(wu)安全(quan)防護三級實驗室(shi)）。廣東(dong)省第二人民(min)醫(yi)(yi)院每天400多份新冠病毒核酸檢測就是在(zai)這里(li)開(kai)展的(de)。
現在，讓我們揭開(kai)廣東省第二人民醫院(yuan)P3實驗室的神秘面紗，看看在這里病毒究竟是(shi)怎樣被“揪出來(lai)”的？
檢測流程每個環節都是精細活
核酸檢測是確診(zhen)新(xin)冠肺(fei)炎的“金標準”，而檢測流程中(zhong)的每一個環節(jie)都(dou)是精細活(huo)，容不(bu)得半點馬虎。
實驗(yan)室內的檢測流程可分為5個(ge)步驟：樣本進入(ru)“傳遞(di)窗(chuang)”—滅(mie)活處理—開蓋(gai)加樣和核酸提取(qu)—擴增(zeng)反(fan)應判斷結果—高壓滅(mie)菌。
第(di)一(yi)步，采集的(de)檢測(ce)樣(yang)本(ben)如咽(yan)拭子(zi)或(huo)肛拭子(zi)，在進入P3實驗室前就得先進入一(yi)個(ge)(ge)特殊(shu)的(de)窗口(kou)——“傳遞(di)窗”，這(zhe)個(ge)(ge)窗口(kou)也(ye)(ye)叫Air Lock，空(kong)氣(qi)鎖，顧名思義(yi)，與空(kong)氣(qi)有關。這(zhe)個(ge)(ge)傳遞(di)窗有不能同時打開(kai)的(de)雙重(zhong)門(men)，保(bao)證(zheng)傳遞(di)樣(yang)本(ben)時帶進去的(de)空(kong)氣(qi)被隔離在雙重(zhong)門(men)中，確保(bao)實驗室外的(de)環境不受污(wu)染(ran)。這(zhe)也(ye)(ye)是“三流(liu)(liu)”中“物流(liu)(liu)”，樣(yang)本(ben)從這(zhe)里開(kai)啟了(le)其(qi)在實驗室中短暫的(de)一(yi)生。
第(di)二(er)步(bu)，樣(yang)本在(zai)水(shui)浴箱經半個(ge)小時56℃的高溫滅(mie)活(huo)，使(shi)(shi)病毒(du)蛋白(bai)不再(zai)有生理活(huo)性(xing)，失去(qu)感染(ran)、致病和繁(fan)殖能(neng)力，使(shi)(shi)實驗(yan)員在(zai)對(dui)(dui)樣(yang)本進行檢測時相對(dui)(dui)安全(quan)，但是(shi)病毒(du)蛋白(bai)的基因序列并沒有受到影響。
第三步，進行開蓋加樣和核(he)酸(suan)提取(qu)。
第四(si)步(bu)，提(ti)取(qu)的(de)(de)核酸送到核酸檢(jian)測(ce)室(shi)內，就要上儀器了。提(ti)取(qu)的(de)(de)核酸加入擴(kuo)增試劑(ji)中，通(tong)過熒(ying)光PCR儀進(jin)行RT-PCR反應(ying)，先將(jiang)提(ti)取(qu)的(de)(de)核酸逆轉錄成DNA，再以DNA為模版(ban)，對特(te)定(ding)位(wei)點進(jin)行擴(kuo)增，利用(yong)(yong)不同的(de)(de)溫度進(jin)行變性(xing)、退火和延(yan)伸(shen)，每個循環采集熒(ying)光值，45個循環后繪(hui)制(zhi)熒(ying)光曲線(xian)，用(yong)(yong)時約110分(fen)鐘(zhong)，實驗(yan)員根據熒(ying)光曲線(xian)分(fen)析判(pan)斷結果的(de)(de)陰性(xing)和陽性(xing)。
第五(wu)步(bu)，實驗(yan)過(guo)程產(chan)生的污(wu)物通(tong)過(guo)高(gao)壓滅菌(jun)后，按相(xiang)關普通(tong)醫療垃圾(ji)處理。“物流”在這里就結(jie)束了(le)。
檢測結果經歷重重比對與復核
任(ren)何一個(ge)環節出(chu)現問題(ti)都可能導致檢(jian)測結果差錯。因此，為保障(zhang)檢(jian)測的質量，檢(jian)測結果將經歷重重的比對與復(fu)核。
據介紹，檢測質量(liang)的保障措施(shi)在(zai)檢測前就(jiu)已(yi)經開始了，樣本采(cai)集(ji)的醫務人員必須經過嚴格的培訓和考核才(cai)能上(shang)崗，樣本的質量(liang)與采(cai)集(ji)的技術密切相關，每個動作流程(cheng)都必須按規定(ding)進行，樣本采(cai)集(ji)完(wan)成后的護送(song)工作也(ye)需按照嚴密的程(cheng)序，由專人專道配送(song)到實驗室。
在(zai)檢測過程中，實驗員始終保(bao)持(chi)謹慎的態度進(jin)行(xing)每一(yi)次測試(shi)，不錯過任何一(yi)個(ge)可疑樣(yang)本，針對(dui)可疑樣(yang)本，還會(hui)選用不同的試(shi)劑進(jin)行(xing)復核確定；其次，按照流程，每進(jin)行(xing)一(yi)批實驗，均會(hui)隨(sui)機插入三個(ge)以上空(kong)白對(dui)照，針對(dui)陽性(xing)樣(yang)本還會(hui)進(jin)行(xing)病毒基(ji)因(yin)的測序比(bi)對(dui)，以防止“假陽性(xing)”的出現。
檢測后，實驗室(shi)還會定期隨機抽取(qu)檢測樣本送到第三方實驗室(shi)進行(xing)檢測，對數據(ju)進行(xing)對比分析，同時實驗室(shi)也會參加(jia)衛生(sheng)主管部(bu)門和(he)廣東(dong)省臨床(chuang)中心的室(shi)間質(zhi)評，保障(zhang)檢測的準確性。
病毒“偵察兵”業務過硬又英勇
在操作中，實驗員面對眼前的樣本(ben)，需要“一個(ge)一個(ge)地揭開蓋(gai)(gai)子，進行開蓋(gai)(gai)加樣和核(he)酸(suan)提取”，這無疑是(shi)與病毒的正面交鋒。核(he)酸(suan)檢測的宗(zong)旨是(shi)高效、有序和安全(quan)。其(qi)中安全(quan)是(shi)重中之重，尤其(qi)是(shi)實驗員的安全(quan)。
因此實(shi)驗員要進入(ru)(ru)P3實(shi)驗室(shi)，首先應在(zai)清潔區內穿戴中(zhong)級防護(hu)服(fu)，通過緩沖間進入(ru)(ru)實(shi)驗室(shi)負壓工作間，在(zai)這里(li)進行標本處理，核酸(suan)提取及檢(jian)測，完畢(bi)后進行空(kong)間、表(biao)面消(xiao)毒，再按順(shun)序脫下防護(hu)服(fu)，通過淋浴(yu)間更衣后，回(hui)到清潔區。這些步驟必須(xu)嚴(yan)格執行，一個都不(bu)能少。
廣東省第二人(ren)民醫院(yuan)P3實驗室(shi)檢測團(tuan)隊目(mu)前有21人(ren)，實行一天三班制。在(zai)疫情暴發階段，為了滿(man)足(zu)檢測需求，縮(suo)短檢測時(shi)間(jian)，實驗室(shi)又在(zai)原有團(tuan)隊基礎上，從風(feng)濕(shi)免疫科(ke)、血(xue)液科(ke)等科(ke)室(shi)的實驗室(shi)調配了人(ren)員。這些病毒“偵(zhen)察兵”70%以上是碩(shuo)士(shi)以上學(xue)歷，均經過(guo)分子生物(wu)學(xue)的培訓，并擁(yong)有多聚(ju)酶鏈反應(ying)（PCR）上崗證。
實驗(yan)室(shi)嚴格遵照(zhao)“新型冠狀(zhuang)病毒肺炎(yan)診療方案”及生(sheng)物(wu)安全要(yao)求，檢測(ce)人(ren)員需在P3實驗(yan)室(shi)負壓密閉的空(kong)間里穿著三級防(fang)護裝備，5個(ge)小(xiao)時(shi)不吃不喝，甚至穿戴成人(ren)紙尿褲(ku)以解決上(shang)廁所(suo)的問題(ti)，隨時(shi)需要(yao)面對因負壓差及裝備嚴密導致的頭暈、嘔吐等癥狀(zhuang)。
“與(yu)戰斗在病(bing)房里(li)(li)的(de)(de)醫護人員不同(tong)，他們藏在實驗(yan)室里(li)(li)，每天(tian)與(yu)病(bing)毒(du)近(jin)距離接(jie)觸(chu)，是人們看(kan)不見的(de)(de)‘最前線’。”林劍(jian)國說。
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生物安全防護實驗室分幾級
生物(wu)安全(quan)防護實(shi)驗(yan)室(shi)是指實(shi)驗(yan)室(shi)的結構(gou)和(he)設(she)(she)施、安全(quan)操作規程、安全(quan)設(she)(she)備能夠確保工作人員在處理含有致病微生物(wu)及其毒素時(shi)，不(bu)受實(shi)驗(yan)對象侵染，并保證周(zhou)圍環境(jing)不(bu)受污(wu)染。
根(gen)據所處理微(wei)生(sheng)(sheng)(sheng)物及其毒(du)素(su)的危(wei)害(hai)(hai)程度(du)不(bu)同，生(sheng)(sheng)(sheng)物安(an)(an)全防護實驗室(shi)分為四級(ji)，一(yi)級(ji)最低，四級(ji)最高。生(sheng)(sheng)(sheng)物安(an)(an)全防護一(yi)級(ji)實驗室(shi)一(yi)般適用(yong)于對健康成年人無致病(bing)作用(yong)的微(wei)生(sheng)(sheng)(sheng)物；二級(ji)適用(yong)于對人和環境有中(zhong)等潛在危(wei)害(hai)(hai)的微(wei)生(sheng)(sheng)(sheng)物；三級(ji)適用(yong)于主要通過(guo)呼吸途徑使人傳(chuan)染上嚴重的甚至是致死疾病(bing)的致病(bing)微(wei)生(sheng)(sheng)(sheng)物或(huo)(huo)其毒(du)素(su)；四級(ji)適用(yong)于對人體具有高度(du)的危(wei)險性，通過(guo)氣溶膠途徑傳(chuan)播(bo)或(huo)(huo)傳(chuan)播(bo)途徑不(bu)明、尚無有效疫苗或(huo)(huo)治(zhi)療(liao)方法的致病(bing)微(wei)生(sheng)(sheng)(sheng)物或(huo)(huo)其毒(du)素(su)。
20世紀80年代，為了(le)(le)研究流行(xing)性出(chu)血熱病毒的(de)傳(chuan)播機制，我國修建了(le)(le)第一個(ge)P3實(shi)驗室(shi)(shi)(shi)。2003年暴發(fa)的(de)SARS疫情，是我國高等級生(sheng)(sheng)物安全實(shi)驗室(shi)(shi)(shi)發(fa)展的(de)一個(ge)分水嶺(ling)。SARS暴發(fa)后，我國發(fa)布(bu)了(le)(le)國家生(sheng)(sheng)物安全實(shi)驗室(shi)(shi)(shi)建設(she)體系規(gui)劃。一批P3實(shi)驗室(shi)(shi)(shi)投入(ru)運行(xing)，并建成(cheng)了(le)(le)P4實(shi)驗室(shi)(shi)(shi)。
2015年1月31日，我國首個P4實(shi)(shi)驗(yan)室、中(zhong)科院武漢國家生物(wu)安全實(shi)(shi)驗(yan)室在武漢竣工(gong)。2018年1月4日，實(shi)(shi)驗(yan)室通過國家衛(wei)計委(wei)（現(xian)國家衛(wei)健委(wei)）高致病性病原微(wei)生物(wu)實(shi)(shi)驗(yan)活動(dong)現(xian)場評估，成為我國乃至亞洲首個正式投入運行的P4實(shi)(shi)驗(yan)室。
當(dang)前，全球的(de)P4實(shi)(shi)驗(yan)室建設正呈(cheng)現超(chao)速發展的(de)趨勢。這與全球化時代的(de)烈性傳染病危(wei)險有關(guan)，也與國(guo)(guo)(guo)家生物安全戰略有關(guan)。據(ju)不完(wan)全統計，全球已知有22個(ge)國(guo)(guo)(guo)家和地(di)區的(de)60個(ge)機(ji)構(gou)擁(yong)有P4實(shi)(shi)驗(yan)室。但由于P4實(shi)(shi)驗(yan)室相(xiang)關(guan)內容涉及(ji)國(guo)(guo)(guo)家生物安全核心(xin)機(ji)密，所以一些國(guo)(guo)(guo)家并未公開數據(ju)。
經過(guo)這(zhe)些(xie)年的發(fa)展(zhan)(zhan)，目(mu)前我國(guo)已有幾十家P3、P4實驗室，為我國(guo)烈性與重大傳染病防控、生物防范和產業發(fa)展(zhan)(zhan)作出了重要貢獻(xian)。（記者 龍躍梅(mei) 通訊員 陳淑華(hua) 王 蒙）
